Некоторые ключевые вопросы тестирования времени жизни флуоресценции

Цзинь Шэнъе, Даляньский институт химической физики, Китайская академия наук

Определение времени жизни флуоресценции является одним из распространенных методов, используемых для оценки времени жизни возбужденного состояния вещества и кинетических процессов носителей. Правильный выбор и использование технологии определения времени жизни флуоресценции, а также правильный сбор и анализ кинетики времени жизни флуоресценции особенно важны для оценки свойств возбужденного состояния вещества, свойств материалов и кинетических процессов носителей. В прошлых научных исследованиях мы часто сталкиваемся с тем, что в технических параметрах и кинетическом анализе оборудования для определения времени жизни флуоресценции существуют определенные недоразумения и заблуждения, которые приводят к неверным суждениям о кинетических свойствах носителей в исследуемых материалах. Поэтому в этой небольшой статье мы хотели бы кратко рассказать о физическом значении некоторых важных технических параметров флуоресцентного оборудования и о понимании кинетических процессов.

01Основы времени жизни флуоресценции

Флуоресценция - это процесс, при котором светоизлучающий материал поглощает возбуждающий фотон, после чего происходит электронный переход на орбитали энергетического уровня, приводящий к испусканию фотонов из возбужденных состояний (например, экситонов, свободных зарядов и т.д.) за счет радиационного сложения. Флуоресценция отражает процесс перехода материала из основного состояния в возбужденное и последующего распада обратно в основное состояние, а время жизни флуоресценции отражает время жизни возбужденного состояния материала. Для иллюстрации этого процесса мы используем в качестве примера молекулу C:

Молекула в основном состоянии C поглощает возбуждающий фотон и переходит в возбужденное состояние C*, а в возбужденном состоянии Cможет распадаться обратно в основное состояние по радиолюминесцентному (kr) или нерадиолюминесцентному (knr) пути. Согласно уравнению скорости реакции первого порядка, в момент времени t после возбуждения CСкорость распада составляет:

Интегрирование по времени дает концентрацию C* в момент t в виде:

где C0* - суммарная концентрация возбужденных состояний в момент t = 0 (т.е. суммарная концентрация возбужденных состояний, образовавшихся в результате возбуждения), а k0= kr + knr.

В экспериментах по определению времени жизни флуоресценции детектор регистрирует интенсивность люминесценции в единицу времени, т.е. скорость люминесценции образца, d(photon)/dt, таким образом:

В реальных процессах детектирования (например, с использованием коррелированного по времени счета одиночных фотонов (TCSPC)) из-за ограничений временной точности прибора детектор фактически определяет интенсивность люминесценции, собирая количество фотонов (ΔP) за небольшой промежуток времени (bin time, Δt), когда Δt достаточно мало:

где A0 = krC*0. Экспериментально полученная кривая времени жизни флуоресценции может быть представлена на рис. 1.

Рисунок 1. Схематическая диаграмма типичной кривой времени жизни флуоресценции

Вся кривая времени жизни флуоресценции состоит из значений ΔP на последовательных интервалах Δt (время бина), в основном состоящих из фронта нарастания (формирование возбужденного состояния) и фронта спада (затухание возбужденного состояния). Формирование возбужденного состояния происходит при оптическом возбуждении, а скорость нарастания фронта определяется механизмом формирования возбужденного состояния (например, прямое возбуждение или передача энергии и т.д.) и функцией отклика прибора (IRF, instrument response function). IRF прибора определяет временное разрешение детектирования времени жизни флуоресценции, о чем будет сказано далее. Затухающая часть времени жизни флуоресценции может быть выражена уравнением (4). Подгоняя кривую распада по экспоненте, можно получить константу скорости распада флуоресценции k0 или время жизни флуоресценции τ0=1/k0 для образца.** Видно, что время жизни флуоресценции τ0, полученное при определении времени жизни флуоресценции, представляет собой сумму констант скоростей всех каналов распада в возбужденном состоянии (как радиационного, так и нерадиационного), а не константу скорости только радиационного комплекса.Также A0 при подгонке кривой распада - это значение Δp (количество фотонов), измеренное в лаборатории в момент t=0. Согласно уравнению (4) можно сделать вывод, что A0 должно быть A0 = krC0 (Эффективность детектирования фотонов детектором здесь не рассматривается). Для выбранных образцов kr (скорость излучательной рекомбинации) можно считать постоянной в стационарных условиях, поэтому A0 на кривой распада можно считать пропорциональным C0, т.е. общей концентрации возбужденных состояний в образце, характеризуемой константой распада k0.

В приведенной выше схеме мы используем в качестве примера уравнение моноэкспоненциального распада. Однако на практике в большинстве образцов наблюдаются процессы двух- и даже трехэкспоненциального распада. Лично я считаю, что существование мультиэкспоненциальных процессов распада обусловлено неоднородностью образца как в пространственном, так и во временном масштабе. Пространственная неоднородность означает, что многочисленные люминесцирующие индивиды (например, отдельные молекулы или отдельные наночастицы), содержащиеся в макроскопическом образце, отличаются друг от друга (сами индивиды или их микроскопическое окружение). Для отдельного люминесцирующего индивида в образце его микроокружение может быть очень разным, например неравномерное распределение дефектных состояний, неравномерная температура, неравномерное распределение поверхностных интерфейсов и т.д., в результате чего k0 люминесцирующих индивидов в образце не является абсолютно одинаковым, а имеет такое распределение, что кривые времени жизни флуоресценции макроскопических образцов отражаются как мультиэкспоненциальный процесс распада, усредненный по многим индивидам. Кроме того, во время получения времени жизни флуоресценции образцов колебания условий окружающей среды или протекание определенных физических процессов могут привести к тому, что образцы будут иметь разное время жизни флуоресценции в разные моменты времени получения, в результате чего конечные кривые времени жизни флуоресценции будут выглядеть как мультиэкспоненциальный процесс. Подгоняя уравнение мультиэкспоненциального процесса под уравнение (5), можно получить значения времени жизни флуоресценции для различных компонентов времени жизни флуоресценции (k1, k2 ...) и вклад каждого компонента в общую кривую времени жизни (A1, A2 ...):

Кроме того, приведенное выше описание дано в терминах первичной реакции (экспоненты e), рассматривающей вид возбужденного состояния как единое целое (например, однолинейное состояние или экситон). Если люминесценция создается комплексом свободных электронов и дырок, то кривую затухания времени жизни флуоресценции необходимо выразить в терминах вторичной реакции (экспонента мощности), т.е:

Кинетический процесс более сложен, соответствующие исследования приведены в соответствующей литературе, и здесь повторяться не будем.

02Технические принципы обнаружения времени жизни флуоресценции

Time-Correlated Single Photon Counting (TCSPC) - наиболее широко используемый на сегодняшний день метод исследования времени жизни флуоресценции. Прежде всего, следует уяснить, что кривая времени жизни флуоресценции является результатом подсчета большого числа фотонов. Если предположить, что в макроскопическом (объемном) образце за одно возбуждение возникает 1000 возбужденных состояний, то кривая времени жизни флуоресценции может быть получена, если детектор регистрирует интенсивность этих 1000 возбужденных состояний при различных задержках после возбуждения. Аналогично, если детектор (например, однофотонный детектор) регистрирует только один фотон при одном возбуждении и повторяет возбуждение 1000 раз, то также можно получить кривую времени жизни флуоресценции образца. Оборудование для определения времени жизни флуоресценции TCSPC в основном состоит из импульсных лазеров, высокочувствительных детекторов фотонов и карт TCSPC, а принцип его работы представлен на рис. 2. Лазерный импульс возбуждает образец до возбужденного состояния, после чего происходит составное испускание фотонов флуоресценции в момент времени t1, которые собираются детектором. Время t1 - это разница во времени между сигналом лазерного импульса и сигналом флуоресценции, регистрируемым TCSPC при данном возбуждении (микровремя). Однако при детектировании с помощью TCSPC не каждый лазерный импульс может вызвать появление флуоресцентных фотонов (это ограничено такими факторами, как квантовая эффективность флуоресценции образца и эффективность сбора данных прибором, например, количество фотонов в единицу времени (counts/s), регистрируемых детектором, обычно на 1-2 порядка ниже, чем частота повторных лазерных импульсов), поэтому для того чтобы регистрировать только микровремена, в которые появляются флуоресцентные фотоны (что экономит много памяти), плата TCSPC записывает микровремена, в которые появляются флуоресцентные фотоны. Плата TCSPC регистрирует разницу во времени между сигналом флуоресценции и сигналом следующего за ним лазерного импульса (t1′ на рис. 2), а затем, исходя из временного периода лазерного импульса T (который является фиксированной величиной при выбранной частоте перестройки лазера), можно получить t1 = T - t'1. Микровремена большого количества собранных фотонов (t1, t2, ...) могут быть использованы в качестве основы для следующего уравнения. t3 ...) большого числа собранных фотонов подсчитываются статистически для получения кривой времени жизни флуоресценции.

Рисунок 2. Принцип определения времени жизни флуоресценции ТЦФК

a: принцип регистрации времени карты TCSPC; b: статистический подсчет времени отдельных фотонов для построения кривой времени жизни флуоресценции; c: структурная схема прибора для обнаружения флуоресценции TCSPC

Микровременной отсчет флуоресцентных фотонов на кривой времени жизни ТСПК основан на количестве каналов. Если временное окно регистрации установлено на 100 нс, а число каналов равно 4096, то интервал временных точек в кривой времени жизни флуоресценции составляет 100 нс/4096 = 24,4 пс, что является временем бина (∆t) на рис. 1 и 2, а точки регистрации времени на оси времени в кривой времени жизни флуоресценции - 0, 24,4, 48,8, 73,2 ----. микротимизация каждого фотона, завершается подсчетом количества фотонов в каждом интервале ∆t для построения кривой времени жизни флуоресценции. Исходя из принципа сбора данных TCSPC, этот метод, как правило, может иметь высокое временное разрешение и более подходит для использования в условиях высокой повторной частоты лазера. При низкой частоте лазера (например, < 1 КГц) эффективность регистрации времени жизни флуоресценции будет низкой (меньшее количество фотонов в единицу времени).Особенно важно отметить, что это время ∆t (bin time) не является временным разрешением датчика времени жизни флуоресценции, а лишь отражает точность синхронизации карты TCSPC!

Кроме того, в детектировании TCSPC существует понятие макровремени, которое представляет собой регистрацию времени флуоресцентного фотона относительно момента начала экспериментальной регистрации и принципиально отличается от микровремени фотона во времени жизни флуоресценции. Карта TCSPC может определять микровремя фотона (разность времен) с точностью < 10 пс, тогда как макровремя обычно регистрируется с точностью порядка микросекунд.

Принципиальная структура прибора для обнаружения флуоресценции TCSPC, построенного по вышеописанному принципу, показана на рис. 2в, где в основном представлены такие основные компоненты, как лазеры, детекторы и платы TCSPC. Лазер и детектор при излучении лазерного излучения и детектировании фотонов выдают синхронные электрические сигналы, которые регистрируются платой TCSPC, а микро- и макровремя каждого фотона флуоресценции фиксируется и рассчитывается для статистического построения кривой времени жизни флуоресценции.

При регистрации времени жизни флуоресценции мы также часто видим, что кривая времени жизни флуоресценции начинается не с момента 0 временного окна, а имеет задержку Td (как показано на рис. 3). При определении времени жизни флуоресценции плата TCSPC получает микротайминг фотонов путем регистрации синхронизированных выходных электрических сигналов от лазера и детектора, а время отклика электронного оборудования и время передачи электрических сигналов в линии вызывают внутреннюю разницу во времени между синхронизированными электрическими сигналами и реальными оптическими сигналами, что приводит к задержке во временном окне времени жизни флуоресценции. Эта задержка не влияет на получение времени жизни флуоресценции, но снижает эффективность использования диапазона временного окна. Величину задержки можно регулировать, изменяя длину линии передачи электрического сигнала или задавая параметр задержки электрического сигнала.

Рисунок 3. Явление задержки при получении времени жизни флуоресценции и его причины.

В дополнение к методу TCSPC время жизни флуоресценции может быть получено с помощью осциллографа. В отличие от TCSPC, где регистрируется только время одного фотона максимум для одного импульса возбуждения, осциллографы позволяют получить высокоскоростную непрерывную регистрацию интенсивности флуоресценции после одного импульса возбуждения для получения кривых времени жизни флуоресценции, причем точность временной развертки определяется полосой пропускания осциллографа (а не частотой дискретизации, как вы понимаете). Например, осциллограф с полосой пропускания 500 М может обеспечить временную развертку с точностью 2 нс, что значительно ниже, чем у TCSPC, а осциллографы с более высокой полосой пропускания (например, выше ГГц) очень дороги. Поэтому из-за ограничения полосы пропускания осциллографический метод подходит в основном для образцов с большим временем жизни флуоресценции (например, фосфоресценции) и для детектирования в условиях более низкой частоты повторного излучения лазера.

03Основные параметры при определении времени жизни флуоресценции

Для получения и анализа точных данных о времени жизни флуоресценции необходимо определить ряд основных параметров флуоресцентной детекции, в первую очередь, временное разрешение, диапазон временного окна и точность измерения времени.

1) Временное разрешение и функция отклика прибора (IRF)

Временное разрешение является важнейшим параметром технологии обнаружения времени жизни флуоресценции, который определяется общей функцией отклика прибора (IRF) системы обнаружения (включая лазер, детектор и плату TCSPC). ** Прибор, используемый в лазере, детекторе и TCSPC-карте, а также другие электронные компоненты преобразуют оптический сигнал во время отклика электрического сигнала (время отклика) и временной джиттер электрического сигнала (джиттер), кроме того, в лазере также существует проблема ширины импульса лазера (ширина импульса), вышеперечисленные факторы определяют величину IRF. Детекция флуоресценции TCSPC При флуоресцентном детектировании TCSPC точность синхронизации карт TCSPC может достигать <10 пс, что обычно намного выше, чем у лазеров и детекторов. Поэтому IRF системы обнаружения флуоресценции TCSPC в основном формируется лазером и детектором.

Со стороны лазера к факторам, влияющим на IRF, в основном относятся ширина лазерного импульса и джиттер синхронизированных электрических сигналов, как показано на рис. 4. Ширина лазерного импульса является одним из важнейших параметров импульсного лазера и выражается значением FWHM (full width half maximum) уширения импульса во времени (рис. 4). Кроме того, плата TCSPC получает данные о повторной частоте и длительности цикла T лазера путем сбора сигнала синхронизации импульсов лазера (SYNC), который вносит временной джиттер между каждым импульсным сигналом, т.е. период импульса в сигнале представляет собой не точное время T, а T + джиттер. Согласно расчету микротайминга флуоресцентных фотонов (t1, t2 на рис. 2) t1 = T - t'1, джиттер в момент времени T (даже если он значительно меньше T) переносится на время t1 и тем самым вносит свой вклад в соответствующую функцию прибора.

Рисунок 4. Вклад лазера в IRF, главным образом, от ширины лазерного импульса и временного дрожания (джиттера) в синхронизированных электрических сигналах

В настоящее время длительность импульсов лазеров, используемых для детектирования ТСПК, может быть выбрана в пределах фс, пс и нс. Джиттер синхронизированных электрических сигналов обычно составляет порядка сотни пс. Когда ширина лазерного импульса значительно больше джиттера (например, ns-лазер), вклад IRF в основном обусловлен шириной импульса, а когда время джиттера значительно больше ширины лазерного импульса (например, fs-лазер), вклад IRF в основном обусловлен джиттером, а когда они близки друг к другу (например, ps-лазер), вклад IRF является общим эффектом.

Со стороны детектора также существуют проблемы времени отклика детектора и временного джиттера электрического сигнала, аналогичные описанным выше (как показано на рис. 5). Когда детектор обнаруживает фотон, он выдает соответствующий электрический импульсный сигнал, нарастающий фронт которого представляет собой время отклика детектора (время переходного процесса); при обнаружении TCSPC устанавливается порог сигнала (TH) для отсеивания действительных электрических импульсных сигналов, а дискриминатор постоянной доли точно регистрирует время прихода фотона в детектор, не подверженный влиянию флуктуаций интенсивности. Дискриминатор с постоянной долей используется для точной регистрации времени прихода фотонов в детектор, не зависящей от флуктуаций интенсивности. Само по себе время прохождения детектора в принципе не вносит вклад в IRF прибора, однако при многократном детектировании фотонов для тех фотонов, которые поступают в детектор одновременно, возникает временное распределение и отклонение выходных электрических сигналов друг от друга, т.е. разброс времени прохождения (см. рис. 5), что создает джиттер детектора и, соответственно, вносит вклад в общую интенсивность детектора. jitter) детектора, что вносит вклад в IRF всей системы.

Рис. 5. Вклад временного джиттера детектора в IRF. Детектор обнаруживает фотон и формирует импульсный телекоммуникационный сигнал, причем время, за которое фотон достигает обнаружения, определяется заданным телекоммуникационным порогом. Тогда из-за наличия развёртки времени переходного процесса возникает временной джиттер (дрожание) электрического сигнала телекоммуникационного сигнала

В настоящее время в коммерческих приборах в основном используются такие детекторы, как однофотонные детекторы и ПМТ, джиттер большинства однофотонных детекторов обычно не превышает 100 пс, в то время как джиттер обычных ПМТ-детекторов может достигать 1-2 нс, а специальных ПМТ с микроканальной пластиной (МКП) или гибридных ПМТ - менее 100 пс. Поэтому автор считает, что если в системе используются обычные ПМТ-детекторы, то она будет пригодна только для детектирования образцов с большим временем жизни флуоресценции.

Отсюда следует, что общая ИРФ системы измерения времени жизни флуоресценции состоит из лазера и детектора, величина которой может быть определена следующим теоретическим уравнением:

В эксперименте IRF используемой системы детектирования флуоресценции может быть получена путем прямого зондирования рассеянного сигнала лазера, как показано на рис. 6. Величина IRF может быть определена как значение FWHM измеренной кривой IRF.

Рисунок 6: IRF для систем детекторов времени жизни флуоресценции

Поэтому кривые времени жизни флуоресценции, измеренные в наших экспериментах, являются результатом свертки ИКФ с сигналом флуоресценции (рис. 7а). **Поскольку ИКФ напрямую определяет временное разрешение регистрации времени жизни флуоресценции, ее размер оказывает огромное влияние на результаты получения и анализа времени жизни флуоресценции. ** Поэтому перед началом эксперимента необходимо определить, подходит ли размер IRF прибора для измерения времени жизни флуоресценции детектируемого образца. Как показано на рис. 7б, при тестировании одного и того же образца результат тестирования прибора с малым ИКФ будет иметь более быстрый и резкий процесс нарастания фронта импульса, а результат тестирования прибора с большим ИКФ будет иметь более медленный и плавный процесс нарастания фронта импульса. Если процесс затухания времени жизни флуоресценции содержит быструю компоненту затухания, то только прибор с малым IRF может эффективно уловить быструю компоненту (IRF меньше времени жизни быстрой компоненты), в то время как прибор с большим IRF из-за ограничения временного разрешения, скорее всего, не сможет обнаружить наличие быстрой компоненты затухания (например, IRF значительно больше времени жизни быстрой компоненты затухания), что приведет к огромному анализу результатов обнаружения. Это приведет к огромной погрешности при анализе результатов. Например, время жизни флуоресценции часто используется для определения концентрации дефектных состояний в образце. Высокая концентрация дефектных состояний в образце приведет к быстрому затуханию времени жизни флуоресценции, и если регистрация флуоресценции осуществляется с помощью прибора, имеющего большой IRF, то велика вероятность того, что обнаружить возможный процесс быстрого затухания не удастся, что приведет к некорректному определению концентрации дефектных состояний в образце. Кроме того, такие процессы, как перенос заряда и энергии в образце, а также некоторые молекулы и полупроводниковые материалы также порождают или имеют процессы быстрого затухания флуоресценции, и исследования динамики флуоресценции таких процессов и материалов также должны проводиться с помощью приборов для определения времени жизни флуоресценции с меньшим ИКФ.

Рис. 7. а) Кривая времени жизни флуоресценции, измеренная в эксперименте, является результатом свертки (конволюции) ИКФ с сигналом флуоресценции. б) Влияние размера ИКФ на кривую времени жизни флуоресценции. прибор с большой ИКФ ограничен по временному разрешению и может не обнаружить быструю компоненту в затухании времени жизни флуоресценции. в) Влияние ИКФ на кривую времени жизни флуоресценции. г) Влияние ИКФ на кривую времени жизни флуоресценции. д) Влияние ИКФ на профиль времени жизни флуоресценции.

Для образцов с временем жизни флуоресценции, меньшим, чем IRF, мы можем извлечь время жизни флуоресценции путем деконволюции при подгонке данных. Моделирование показало, что деконволюция позволяет точно выделить время жизни флуоресценции вплоть до IRF/5 (например, при IRF = 200 пс деконволюция позволяет точно подобрать время до ~40 пс). В настоящее время некоторые производители коммерческих приборов устанавливают предел деконволюции на IRF/10 и определяют его как временное разрешение прибора, что, на мой взгляд, является преувеличением и неточностью. Ведь результаты деконволюции получены на основе математических методов проецирования, а не точного детектирования, и по ним можно сделать лишь приблизительную проекцию времени жизни флуоресценции меньше IRF. Для более точного детектирования необходимо использовать детектирующее оборудование с более высоким временным разрешением, такое как сверхбыстрая апконверсия флуоресценции и сверхбыстрые стриковые камеры.

Кроме того, следует еще раз подчеркнуть, что временное разрешение метода определения времени жизни флуоресценции определяется временем IRF системы в целом, а не временем бина на кривой времени жизни флуоресценции (∆t на рис. 1) или микровременной точностью синхронизации карты TCSPC. ∆t и точность синхронизации отражают только временное разрешение платы TCSPC, но не IRF всей системы обнаружения флуоресценции, включая лазер и детектор, поскольку IRF лазера и детектора обычно намного больше, чем точность синхронизации TCSPC, и IRF всей системы ограничивается лазером и детектором.

В настоящее время коммерчески доступные приборы для определения времени жизни флуоресценции имеют варианты с различными конфигурациями лазеров и детекторов.Таким образом, для параметра временного разрешения при выборе конфигурации прибора следует ориентироваться на следующие моменты:

• Какова ширина импульса лазера
• время джиттера сигнала лазерной синхронизации
• Время джиттера детектора
• Точность синхронизации карты TCSPC, количество каналов и другая информация

Конечный IRF системы будет больше или равен максимальному значению времени в указанных выше параметрах.

2) Временное окно обнаружения и частота повторного включения лазера

Диапазон временного окна для определения времени жизни флуоресценции ТСПК зависит в основном от частоты лазера, причем максимальный диапазон временного окна составляет время цикла лазерной частоты Т. Однако из-за задержки при передаче электрического сигнала, как показано на рис. 3, часть диапазона временного окна занимает время задержки. В общем случае диапазон временного окна должен быть выбран как минимум в 2-3 раза больше времени жизни флуоресценции, поэтому необходимо выбрать соответствующую частоту повторения лазерного излучения и отрегулировать задержку электрического сигнала в зависимости от времени жизни флуоресценции образца. Кроме того, если в ТЦФК время бина (∆t) кривой времени жизни флуоресценции определяется путем деления диапазона временного окна на количество каналов, то при слишком большом временном окне значение времени бина будет увеличиваться (например, ∆t ≈ или > IRF), что приведет к снижению временного разрешения системы.

С другой стороны, для метода однофотонного счета TCSPC использование лазера со слишком низкой частотой пересчета означает низкое количество фотонов, получаемых в единицу времени, что серьезно снижает эффективность получения кривой времени жизни флуоресценции, а также отношение сигнал/шум.

04Корректное отображение кривых времени жизни флуоресценции

Как уже говорилось выше, полная кривая времени жизни флуоресценции должна включать в себя как нарастающие, так и спадающие фронты. Обе части физически важны. В литературе часто встречаются данные о времени жизни флуоресценции, в которых отсутствует компонент нарастающего фронта, что по своей сути неверно. Восходящий фронт представляет собой процесс генерации возбужденного состояния образца, так как прямое возбуждение люминесцирующих видов может отражать размер IRF в момент детектирования, что может быть использовано для определения отсутствия на кривой времени жизни флуоресценции возможности быстрых компонент распада, а также может быть использовано для наблюдения некоторых образцов в процессе переноса энергии и других процессов (или другого процесса генерации возбужденного состояния), например, показанного на рис. 8, поэтому ему следует уделить достаточное внимание. Конечно, если время жизни флуоресценции значительно больше IRF или нет необходимости обращать внимание на быстрые процессы, то можно и не обращать внимания на фронт нарастания. Кроме того, при подгонке кривой времени жизни флуоресценции (особенно при малом времени жизни флуоресценции) следует учитывать IRF, чтобы получить более точные результаты подгонки времени жизни флуоресценции.

Рис. 8. При резонансном переносе энергии между донором и акцептором о кинетическом процессе переноса энергии можно судить по совокупности кривых времени жизни флуоресценции донора и акцептора. Если время переноса энергии > IRF, то кривая времени жизни флуоресценции акцептора имеет более медленный фронт нарастания, чем IRF, и сопровождается быстрым затуханием флуоресценции донора.

Источник: Tristar Spectrum@WeChat
Время:2022-04-19