프레젠테이션

시냅스 연결성 변화는 거의 모든 뇌 질환과 관련이 있습니다. 특히 시냅스 손실은 정신분열증이나 알츠하이머병과 같이 인지 기능을 방해하는 뇌 질환에서 특히 심각한 문제입니다. 이러한 질병을 퇴치하기 위한 전략으로 신경 연결의 수를 증가시키는 새로운 메커니즘을 발견하고 시냅스 연결의 수를 증가시키는 새로운 화학 프로브의 개발을 촉진하기 위한 연구 프로그램의 일환으로 고함량, 1차 뉴런 기반 스크리닝 플랫폼이 개발되었습니다. 이러한 프로브는 다양한 뇌 질환 치료를 위한 차세대 약물 개발의 플랫폼 역할을 할 것입니다.

고함량 스크리닝 플랫폼의 일부로서 배치 간 재현 가능한 결과를 보장하려면 모든 세포가 일관되게 접종되고 실험 기간 동안 세포 활동이 유지되는지 확인하는 것이 중요합니다. 이 애플리케이션 노트에서는 가장 민감한 일차 신경세포의 디스펜싱을 위한 정밀하고 안정적이며 견고한 솔루션으로서 MANTIS® 액체 처리기의 적용 가능성을 강조하는 실험 절차에 대해 설명합니다.

제작

PDL 코팅 1536웰 오로라 마이크로 플레이트 1개

50mL 배지 포함.

- 1X 뉴로바살-A 배지
- 2.5% 글루타맥스-I
- 02% 젠타마이신 시약
- 2% B-27 보충제
- 10 uM FUDR

P0 생쥐 새끼에서 추출한 5 × 106 원시 피질 세포

포뮬라트릭스® 맨티스 액체 프로세서

에펜도르프 5810 R 원심분리기

레이저 기반 공초점 이미징 플랫폼인 GE IN Cell Analyzer 6000

방법론

1. 1536 웰 오로라 마이크로타이터 플레이트에 신경세포를 접종했습니다.
2. 1536개의 웰에 각각 3개의 103개 세포가 들어 있는 배지 15μL를 분배합니다.
3. 접시를 200g으로 1분간 원심분리합니다.
4. 7일 동안 먹이를 주지 않고 세포를 배양했습니다.
5. IN Cell Analyzer 6000을 사용한 DIV7 위상 대비를 통한 세포 계수

결국

7일 배양 후 평균 위상 세포 수는 96웰 또는 384웰 플레이트와 비슷했으며, 세포 수 균일성에 대한 CV는 1536웰 플레이트 전체에서 10% 미만이었습니다.

그림 1: 1536웰 오로라 마이크로플레이트의 단일 웰에 있는 원시 신경세포.

요약

Formulatrix MANTIS는 1536개의 소량 웰 플레이트에도 일관되게 세포를 디스펜싱합니다. 또한 부드러운 저전단 디스펜싱 기법을 사용하여 체외 세포 활동을 연장합니다.

감사 메모

이 연구는 플로리다 주피터에 있는 스크립스 연구소의 크리스 허브스가 수행했습니다. 세계 최대의 비영리 민간 연구 기관 중 하나인 스크립스 연구소(TSRI)는 기초 생의학 과학의 최전선에 서 있으며, 생명의 가장 근본적인 과정을 이해하는 것을 목표로 하는 의학 연구의 핵심 요소입니다. 지난 수십 년 동안 이 연구소는 건강과 인간 조건 개선에 크게 기여한 오랜 역사를 가지고 있습니다.