Presentación

Las alteraciones de la conectividad sináptica están asociadas a casi todos los trastornos cerebrales. En particular, la pérdida de sinapsis es un problema especialmente grave en los trastornos cerebrales que alteran la función cognitiva, como la esquizofrenia y la enfermedad de Alzheimer. En el marco de un programa de investigación destinado a descubrir nuevos mecanismos que desencadenen un aumento del número de conexiones neuronales como estrategia para combatir estas enfermedades, se han desarrollado plataformas de cribado basadas en neuronas primarias altamente intrínsecas que facilitan el desarrollo de nuevas sondas químicas que desencadenen un aumento del número de conexiones sinápticas. Estas sondas servirán de plataforma para el desarrollo de futuras generaciones de fármacos destinados a tratar diversas enfermedades cerebrales.

Como parte de una plataforma de cribado de alta inclusión, es esencial garantizar que todas las células se inoculan de forma consistente y que la actividad celular se mantiene durante el experimento para asegurar resultados reproducibles de lote a lote. Esta nota de aplicación describe un procedimiento experimental que pone de manifiesto la idoneidad del procesador de líquidos MANTIS® como solución precisa, fiable y robusta para dispensar incluso las células neuronales primarias más sensibles.

Materiales

1x placa microtiter Aurora de 1536 pocillos recubierta de PDL

50 mL de medio conteniendo .

- 1X Medio Neurobasal-A
- 2.5% Glutamax-I
- 02% Reactivo de gentamicina
- 2% B-27 Suplementos
- 10 uM FUDR

5 x 106 células corticales primarias de crías de ratón P0

Procesador de líquidos FORMULATRIX® MANTIS

Centrífuga Eppendorf 5810 R

Plataforma de imagen confocal basada en láser GE IN Cell Analyzer 6000

Métodos

1. Células neuronales inoculadas en placas de microtitulación Aurora de 1536 pocillos
2. Se dispensaron 15 μL de medio con 3 x 103 células en cada uno de los 1536 pocillos
3. Centrifugar las microplacas a 200 g durante 1 minuto.
4. Las células se cultivan sin alimentación durante 7 días
5. Recuento de células mediante contraste de fase DIV7 utilizando IN Cell Analyzer 6000

Resultados

Tras 7 días de incubación, el recuento medio de células en fase era comparable al de una placa de 96 o 384 pocillos, con un CV inferior a 10% para la uniformidad del recuento celular en la placa de 1536 pocillos.

Figura 1. Células neuronales primarias en un único pocillo de una placa de microtitulación Aurora de 1536 pocillos.

Resumen

El Formulatrix MANTIS dispensa células de forma consistente, incluso en pequeños volúmenes de placas de 1536 pocillos. Además, al utilizar una técnica de dispensación suave y de bajo cizallamiento, el instrumento puede prolongar la actividad celular in vitro.

Agradecimientos

Este trabajo ha sido realizado por Chris Hubbs, del Instituto de Investigación Scripps de Júpiter (Florida). El Instituto de Investigación Scripps (TSRI) -una de las mayores instituciones privadas de investigación sin ánimo de lucro del mundo- está a la vanguardia de la ciencia biomédica básica y es parte esencial de la investigación médica destinada a comprender los procesos más fundamentales de la vida. A lo largo de las últimas décadas, el Instituto ha realizado importantes contribuciones a la mejora de la salud y la condición humana.