使用 MANTIS® 液体处理器在高内涵、基于初级神经元的筛选平台中分配细胞
介绍
突触连接的改变与几乎所有的脑部疾病有关。尤其是，突触丢失是破坏认知功能的脑部疾病的一个特别严重的问题，例如精神分裂症和阿尔茨海默病。高内涵、基于初级神经元的筛选平台作为研究计划的一部分已被研发出来，其旨在发现引发神经连接数量增加的新机制以作为对抗这些疾病的策略，同时促进引发突触连接数量增加的新化学探针的研发。这些探针将作为未来几代治疗各种脑部疾病药物的开发平台。
作为高内涵筛选平台的一部分，为了确保批次间结果的可重复性，必须保证所有细胞接种一致，并且在实验期间保持细胞活性。本应用说明介绍了一个实验程序，强调了MANTIS® 液体处理器作为一种精确、可靠和强大的解决方案的适用性，即使是最敏感的原代神经元细胞也可以进行分配。
材料
1x PDL 涂层 1536 孔 Aurora 微孔板
50 mL 培养基，含有:
• 1X Neurobasal-A 培养基
• 2.5% Glutamax-I
• 02% Gentamicin 试剂
• 2% B-27 补充剂
• 10 uM FUDR
从 P0 小鼠幼崽中提取的5×106 个原代皮层细胞
FORMULATRIX® MANTIS 液体处理器
Eppendorf 5810 R 离心机
GE IN Cell Analyzer 6000 基于激光的共聚焦成像平台
方法
- 神经元细胞在 1536 孔 Aurora 微孔板上接种
- 将含有 3 x 103 个细胞的 15 μL 培养基分配到 1536 个孔中的每个孔中
- 将微孔板在 200 g 离心力下离心 1 分钟
- 细胞在不饲养的情况下培养 7 天
- 使用 IN Cell Analyzer 6000 通过 DIV7 Phase Contrast 对细胞进行计数
结果
培养 7 天后，平均相细胞计数与 96 或 384 孔板相当，整个 1536 孔板的细胞计数均匀性 CV 小于 10%。
图 1. 1536 孔 Aurora 微孔板单孔中的原代神经元细胞
总结
即使是分配至小体积的 1536 孔板，Formulatrix MANTIS 也能够一致地分配细胞。此外，通过使用温和、低剪切力的分配技术，该仪器可延长体外细胞活性。
致谢
这项工作是由佛罗里达州木星斯克里普斯研究所的 Chris Hubbs 完成的。斯克里普斯研究所 (TSRI) – 世界上最大的私人非营利研究机构之一——站在基础生物医学科学的前沿，是医学研究的重要组成部分，旨在理解生命的最基本过程。在过去的几十年中，该研究所对为健康和人类状况改善做出重大贡献方面进行了长期的记录。